k562细胞用什么冻存液冻存

细胞冻存注意事项：

1.欲冷冻保存之细胞应在生长良好(log phase) 且存活率高之状态，约为80 – 90 %致密度。

2. 冷冻前检测细胞是否仍保有其特有性质，例如hybridoma 应在冷冻保存前一至二日测试是否有抗体之产生。

3. 注意冷冻保护剂之品质，冻存液：10%DMSO+90%FBS,我做细胞试验从不加双抗，NAHCO3-未加

4. 冷冻保存的细胞浓度：

冻存方法

1.冷冻前一日前更换半量或全量培养基，观察细胞生长情形。

2.收集培养之细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1 ml) 计数细胞浓度及冻前存活率。 离心速度不要大于1000rpm/min或800g/min。

3.离心弃上清，加入适量冷冻保存溶液，使细胞浓度为1-5 x 106 cells/ml，混匀，分装于无菌冻存管中，1 ml/vial，悬浮细胞可以浓一些。

4.冷冻保存方法1: 冷冻管置于4 oC 10 分钟→ -20 oC 30 分钟→ -80 oC 16～18 小时(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 长期储存。 或4 oC 1h→ -20 oC 1h→ -80 oC 1h(或隔夜) → 液氮槽vapor phase起点排行榜

最常见的我的k562细胞就是这样做的。

阳离子脂质体法 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA或RNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。虽在体外基因转染中有很高的效率，但在体内，能被血清清除，并在肺组织内累积，诱发强烈的抗炎反应，导致高水平的毒性，这在很大程度上限制了其应用。

阳离子聚合物 ：稳定转染,瞬时转染,所有细胞。除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单，适用范围广，重复性好等特点外，还具有在体内，转染效率高，细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。

细胞保存液是用来低温保存细胞，维持细胞活性的。分为-80℃超低温冰箱冻存和-196℃液氮冻存。短期保存(1年以内)推荐-80℃超低温冰箱冻存，长期保存(1年以上)推荐使用-196℃液氮冻存。品牌有好多，临床外周血造血干细胞保存使用最多的是日本麒麟公司的CP1和南京三生公司的亘益，科研使用的保存液没什么技术含量，自己配就可以，要是嫌麻烦那就买呗，网上随便找找，一大堆品牌。

仪器1. 净化工作台2. 离心机3. 恒温水浴箱4. 冰箱(4℃、-20℃、-70℃)5. 倒置相差显微镜6. 培养箱7. 液氮冰箱

玻璃器皿1. 吸管(弯头、直头)2. 培养瓶3. 玻璃瓶(250ml、100ml)4. 废液缸。

塑料器皿1. 吸头2. 枪头3. 胶塞4. 移液管(10ml)5. 15ml离心管6. 冻存管(1～2ml)。

其他物品1. 微量加样枪2. 红血球计数板3. 记号笔4. 医用橡皮膏5. 移液枪(五)试剂1. D-Hanks液2. 小牛血清3. 培养液4. 双抗(青霉素、链霉素)5. 胰蛋白酶(0.08%)6. 1NHCl7. 7.4%NaHCO38. DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油。

细胞冻存1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培养液;

2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中;

3. 离心1000rpm，5min;

4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml～1×107/ml;

5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml;

6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者;

7. 冻存：标准的冻存程序为降温速率-1～-2℃/ min;当温度达-25℃以下时，可增至-5℃～-10℃/min;到-100℃时，则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。